细胞因子作为调控细胞生长、分化、免疫应答的核心信号分子,是细胞实验、类器官构建、干细胞研究、免疫细胞培养中不可或缺的关键试剂。但浓度把控、溶解方式、储存条件、添加时机等细节稍有偏差,就可能导致实验结果不稳定、重复性差,甚至直接影响数据可靠性。
今天这份细胞因子操作指南干货,从溶解、分装、冻存到实验添加全流程拆解,把实操中的易错点、避坑要点一次性讲透,帮你精准用好细胞因子,少走弯路、稳出数据。
复溶前准备
确认组分:一管重组蛋白冻干粉;一管复溶buffer
提示:
✅️ 不同产品复溶buffer成分有所差异,不建议混合使用;
✅️ 使用前观察冻干粉状态是否正常;
第一步 | 开盖前离心
将管壁的冻干粉离心至管底,离心条件:10000rpm离心30-60s或4000rpm离心5min;
第二步 | 复溶获得储存液
向冻干粉中加入复溶buffer,复溶过程中,用枪吹打混匀即可,避免剧烈涡旋震荡,否则有可能影响细胞因子的活性;
✅️ 禁止略过复溶步骤直接将冻干粉稀释为低浓度工作液,否则可能导致无法完全溶解,造成损失;
✅️ 复溶时推荐细胞因子储存液浓度范围0.1-1mg/ml,可根据产品规格对复溶buffer用量进行计算;
第三步 | 稀释为工作液
取用适量细胞因子储存液直接添加到培养基中稀释至工作浓度;
提示:
✅️ 细胞因子的工作浓度应结合具体实验需求而定,首次实验可查阅文献参考。稀释液可使用常见培养基或1*PBS;
第四步 | 添加载体蛋白溶液长期储存
向复溶后的细胞因子中添加终浓度为10%FBS载体蛋白溶液,用于长期储存;已溶解的细胞因子在4℃可保存1周,添加载体蛋白后可分装于-20℃或-80℃长期保存
提示:
✅️ 分装冻存时,需保证蛋白浓度不低于10ug/ml,而且每管中的溶液体积不小于10ul;
推荐三种含载体蛋白的溶液:
✅️ 0.1%BSA(牛血清白蛋白);
✅️ 10%FBS(胎牛血清);
✅️ 5%HSA(人血清白蛋白);
操作流程图
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